滅菌是細(xì)胞生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)的基石。如果沒(méi)有經(jīng)過(guò)消毒的實(shí)驗(yàn)室儀器，大多數(shù)生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室將無(wú)法進(jìn)行任何涉及培養(yǎng)活細(xì)胞的工作。雖然許多實(shí)驗(yàn)室樂(lè)于與無(wú)菌建立非正式的關(guān)系，但低估擁有無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室儀器的影響極為罕見(jiàn)。盡管如此，滅菌通常被歸為初級(jí)實(shí)驗(yàn)室人員的一項(xiàng)重要的苦差事，就像清潔玻璃器皿一樣。   

一個(gè)薄弱的器械滅菌過(guò)程可能導(dǎo)致比完全缺乏滅菌設(shè)施更大的經(jīng)濟(jì)損失。當(dāng)實(shí)驗(yàn)室使用消毒不良的設(shè)備時(shí)， 實(shí)驗(yàn)很容易受到污染，導(dǎo)致因產(chǎn)生無(wú)法使用或異常結(jié)果而蒙受損失。在某些情況下，受污染的設(shè)備會(huì)污染其他儀器或硬件，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室經(jīng)歷多點(diǎn)實(shí)驗(yàn)失敗，這些失敗可能難以隔離和補(bǔ)救。要避免這些滅菌不充分的陷阱，需要以嚴(yán)格且以結(jié)果為導(dǎo)向的方法來(lái)觀察無(wú)菌情況——許多實(shí)驗(yàn)室可以從采用這種做法中受益。 

哪些器械需要消毒？

對(duì)于任何進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)工作的實(shí)驗(yàn)室來(lái)說(shuō)，滅菌都是極其重要的，以至于可以毫不夸張地說(shuō)，涉及細(xì)胞培養(yǎng)的所有實(shí)驗(yàn)室儀器都必須進(jìn)行滅菌。大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室都有大量硬件，即使他們進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，也不會(huì)直接參與細(xì)胞培養(yǎng)工作。重要的是，即使是不參與細(xì)胞培養(yǎng)的設(shè)備也可以從滅菌中受益——假設(shè)實(shí)驗(yàn)室可以承擔(dān)滅菌成本。   

例如，常規(guī)進(jìn)行基因測(cè)序或 PCR 的實(shí)驗(yàn)室可能會(huì)發(fā)現(xiàn)對(duì)執(zhí)行分子生物學(xué)工作所必需的移液器和熱循環(huán)儀進(jìn)行消毒是一個(gè)困難的經(jīng)濟(jì)提議。因?yàn)檫@些設(shè)備不參與細(xì)胞培養(yǎng)，不完全無(wú)菌的后果是微不足道的——或者說(shuō)基本原理是這樣的。至關(guān)重要的是，這個(gè)理由是不正確的。   

雖然這些儀器上的生物污染確實(shí)不會(huì)導(dǎo)致非常昂貴的細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)在暴露于錯(cuò)誤微生物后死亡，但即使是離體實(shí)驗(yàn)也可能會(huì)因錯(cuò)誤暴露于生物材料而破壞其結(jié)果。 

即使對(duì)于從未直接暴露于任何生物材料的實(shí)驗(yàn)室硬件，滅菌也是一項(xiàng)重要的預(yù)防措施。例如，通過(guò)對(duì)生物安全柜內(nèi)部進(jìn)行消毒，實(shí)驗(yàn)室可以確保其實(shí)驗(yàn)的工作空間不會(huì)成為污染源。同樣，對(duì)玻璃器皿進(jìn)行消毒可確保它可以與敏感實(shí)驗(yàn)相鄰使用，而不必?fù)?dān)心破壞結(jié)果。 

然而，并非所有實(shí)驗(yàn)室都有足夠的資金來(lái)對(duì)所有可能受益的東西進(jìn)行消毒。滅菌通常是昂貴的，因此大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室最終會(huì)優(yōu)先對(duì)關(guān)鍵設(shè)備進(jìn)行滅菌，同時(shí)允許遠(yuǎn)離細(xì)胞培養(yǎng)區(qū)域的其他儀器進(jìn)行未滅菌。因此，對(duì)滅菌資源進(jìn)行分類是實(shí)驗(yàn)室工作人員養(yǎng)成的一個(gè)好習(xí)慣，因?yàn)槿绻麑?shí)驗(yàn)室中的大多數(shù)其他設(shè)備沒(méi)有依次滅菌，那么未經(jīng)滅菌就無(wú)法使用的硬件幾乎沒(méi)有用處。   

實(shí)驗(yàn)室在儀器滅菌過(guò)程中需要什么

滅菌過(guò)程有幾個(gè)不同的階段，每個(gè)階段都需要實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不同的空間。滅菌過(guò)程的空間復(fù)雜性取決于實(shí)驗(yàn)室是進(jìn)行研究、臨床工作還是制造。制造和臨床工作比研究工作具有更高的無(wú)菌標(biāo)準(zhǔn)，因此滅菌空間的分離和復(fù)雜程度更加明顯。簡(jiǎn)而言之，滅菌過(guò)程所需的三個(gè)空間是：

• 去污區(qū)

• 包裝區(qū)

• 殺菌區(qū)

每個(gè)空間都有不同的用途，對(duì)應(yīng)于它負(fù)責(zé)容納的滅菌過(guò)程的階段。去污區(qū)是建立無(wú)菌基礎(chǔ)的地方，通過(guò)使用粗略的方法（如用非無(wú)菌水或清潔化學(xué)品進(jìn)行清洗）盡可能多地去除污染物。   

因?yàn)槿ノ弁且患鑱y的事情，所以大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室更喜歡在主實(shí)驗(yàn)室工作間之外有一個(gè)去污空間。去污的目的是從被消毒的儀器或設(shè)備上去除所有可見(jiàn)的污染。這可能包括從污垢團(tuán)塊到結(jié)塊清潔化學(xué)品的任何東西。重要的是，去污過(guò)程不能留下任何在過(guò)程開(kāi)始之前不存在的東西。因此，大多數(shù)去污過(guò)程都是通過(guò)用水清洗設(shè)備來(lái)結(jié)束的。 

去污后，實(shí)驗(yàn)室必須對(duì)要去污的設(shè)備進(jìn)行包裝，使硬件的功能表面可以暴露在消毒器中，但不能暴露在外部空氣或任何其他可能導(dǎo)致新污染的環(huán)境中。 

例如，要在高壓滅菌器中使用熱蒸汽對(duì)桶的內(nèi)部進(jìn)行消毒，需要通過(guò)將一塊錫箔松散地放在桶口頂部并用膠帶將其固定在兩側(cè)來(lái)“包裝”桶. 因此，當(dāng)高壓滅菌器中的熱蒸汽對(duì)桶進(jìn)行消毒時(shí)，蒸汽可以在錫箔下方流動(dòng)，對(duì)桶的功能表面（容納液體的內(nèi)部）進(jìn)行消毒，然后流出。因?yàn)殄a箔是用膠帶固定在桶上的，所以即使桶從高壓滅菌器中取出，桶的功能表面也將保持免受露天和無(wú)菌狀態(tài)的影響。然而，對(duì)于處理臨床材料或制造藥物的實(shí)驗(yàn)室來(lái)說(shuō)，無(wú)菌包裝的標(biāo)準(zhǔn)遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出了簡(jiǎn)單的錫紙桶方案。 

滅菌區(qū)是滅菌過(guò)程的核心。根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的方式，滅菌區(qū)可以使用幾種不同的滅菌方法中的一種。這些方法可以包括熱蒸汽和壓力，例如在標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室高壓釜中，或者更奇特的方法，例如伽馬射線照射。大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室都堅(jiān)持使用其設(shè)施中可用的任何滅菌方法，這意味著絕大多數(shù)時(shí)間都使用高壓滅菌器。然而，對(duì)于涉及藥品或醫(yī)療器械制造的實(shí)驗(yàn)室，輻照更為常見(jiàn)。 

滅菌過(guò)程驗(yàn)證

滅菌運(yùn)行完成后，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室都有幾種方法之一來(lái)驗(yàn)證他們的設(shè)備是否真正完全滅菌，而不僅僅是部分滅菌。最簡(jiǎn)單的驗(yàn)證方法是不起眼的高壓滅菌膠帶。雖然它僅適用于在高壓滅菌器的情況下驗(yàn)證滅菌，但高壓滅菌器膠帶是有效的，因?yàn)楫?dāng)它暴露在滅菌條件下達(dá)到保證完全滅菌所需的時(shí)間時(shí)，它會(huì)改變顏色。因此，許多實(shí)驗(yàn)室在滅菌過(guò)程中大量使用高壓滅菌膠帶。  

更復(fù)雜的滅菌驗(yàn)證需要細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。在典型的滅菌驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中，活細(xì)菌培養(yǎng)物的樣本通過(guò)實(shí)驗(yàn)室使用的滅菌過(guò)程，然后對(duì)培養(yǎng)物的容器進(jìn)行擦拭以獲取存活的細(xì)胞。然后將拭子培養(yǎng)幾天并觀察新的細(xì)胞集落。如果沒(méi)有菌落生長(zhǎng)，則滅菌過(guò)程成功。  

使滅菌管道取得成果

在實(shí)驗(yàn)室能夠成功地對(duì)相關(guān)的細(xì)胞培養(yǎng)硬件進(jìn)行消毒之前，他們需要準(zhǔn)備好合適的用品。跟蹤滅菌過(guò)程所需的大量試劑、清潔劑和一次性用品可能非常困難，尤其是對(duì)于沒(méi)有長(zhǎng)期無(wú)菌技術(shù)或無(wú)菌制造歷史的實(shí)驗(yàn)室而言。對(duì)于從高壓滅菌膠帶到去污階段清潔解決方案的所有內(nèi)容，與經(jīng)驗(yàn)豐富的供應(yīng)商合作是支持成功滅菌和實(shí)驗(yàn)的主要因素。值得慶幸的是，對(duì)于剛剛起步的實(shí)驗(yàn)室來(lái)說(shuō)，這樣的供應(yīng)商觸手可及——只需一個(gè)電話即可開(kāi)始與他們合作。